类器官构建及分化

图1. MasterAim® 类器官培养试剂盒用于构建肾类器官的生长过程

肾类器官的鉴定

图2. 肾类器官的组织学鉴定

肾脏类器官的自组织与结构特征分析：

（A）培养至第14天的肾脏类器官H&E染色结果。红色箭头指示管状结构，绿色箭头指示肾小球结构。

（B-F）细胞标志物：SLC12A1；近曲小管标志物：LTL；肾小管/集合管标志物：HNF1B；远曲小管标志物：CDH1；间质细胞标志物：第14天肾脏类器官免疫荧光染色结果。足细胞标志物：NPHS1/PODXL；内皮细胞标志物：CD31； 髓袢升支粗段上皮MEIS1/2/3。



图3. 肾类器官的分子生物学鉴定

qPCR分析hESC、EB和肾类器官的基因表达：提示肾类器官表达肾组织标志性基因。

肾类器官用于评估药物毒性的测试

类器官对于中、低毒性药物（IC50 > 400 μM）的毒性评价：实验采用不同浓度的马兜铃酸A、穿心莲内酯、顺铂、他克莫司和多柔比星处理肾类器官，在处理48 h和72 h后，分别拍摄明场图像并通过ATP法测定肾类器官存活率，构建非线性回归曲线以计算IC50值。结果显示，肾类器官对药物毒性具有较高敏感性，各药物对肾类器官细胞活性的抑制率存在显著差异。

肾类器官对于高毒性药物（IC50 < 400 μM）的毒性评价：实验分别采用不同浓度的D-甘露醇、庆大霉素、对乙酰氨基酚、碘化钠、次乌头碱处理肾类器官，在处理48 h、72 h、96 h拍摄明场图，并计算肾类器官存活率（ATP法）的非线性曲线回归与IC50值，提示不同药物对肾类器官细胞活性的抑制率存在显著差异。

高肾毒性药物的肾类器官损伤与凋亡分析



高肾毒性药物（多柔比星、顺铂、他克莫司）处理肾类器官24 h后，qPCR分析肾损伤标志基因（KIM-1）与CASP家族凋亡基因（ ）表达，提示肾类器官可用于分子机制研究。