小鼠表皮类器官构建流程

图1. 小鼠表皮类器官构建流程

小鼠表皮类器官构建及传代

图2. 使用MasterAim®小鼠表皮类器官完全培养基构建的小鼠表皮类器官（scale bar（White）=100 μm，scale bar（black）=500 μm）

P0-D0：取三只无毛胎鼠的表皮组织，经处理后可获得并接种 10 个以上的基质胶滴。

P0-D10：接种后的表皮细胞状态良好，持续培养至第 10 天时，类器官体积逐渐增大，可形成直径约 50 μm 的类器官。显微镜下呈规则球形结构、边缘光滑；随着体积的增大，可观察到表皮棘层逐渐增厚，部分类器官的中心腔内出现黑色代谢产物。

P1-P6：在传代培养过程中，小鼠表皮类器官的主要形态为实心球状结构。

类器官传代与扩增

图3-4. 使用MasterAim®小鼠表皮类器官培养基构建的小鼠表皮类器官生长曲线及传代周期

MasterAim®小鼠表皮类器官培养基构建效率较高，稳定传代，如图3所示；7-10天可实现快速传代，如图4所示。

小鼠表皮类器官鉴定

组织鉴定

图5. 小鼠表皮类器官H&E鉴定

H&E染色结果显示，小鼠表皮类器官呈现球形结构，外层细胞排列紧密，中心为实心结构。此外，类器官中心可见部分细胞扁平化，胞质伊红染色增强，表明类器官从基底层向表层细胞分化时，核质比降低。

分子鉴定

图6. 小鼠表皮类器官的免疫荧光鉴定结果。（Proliferation marker: Ki67, basal cell marker: CK5, epidermal differentiation marker：Loricrin， scale bar = 50 μm）

免疫荧光检测小鼠表皮类器官特征蛋白表达，Ki67 阳性提示类器官内细胞处于活跃增殖状态；CK5 阳性细胞主要分布于类器官外围，表明存在丰富的表皮干细胞和基底细胞；Loricrin 阳性信号集中于类器官腔体内侧，提示角质细胞的分化特征。该结果验证了表皮类器官模型的分层结构与生理特征。

图7.小鼠肝脏组织与小鼠表皮类器官qPCR结果

qRT-PCR检测小鼠肝脏组织和小鼠表皮类器官特异性基因表达。结果显示，小鼠表皮类器官同时表达基底层标志物（Krt17、Krt14）和角质层标志物（Krt1、Loricrin），表明其具有从增殖性基底细胞到终末分化角质层的完整表皮结构。PCNA 阳性证实细胞处于增殖状态，支持类器官在体外进行一定时间的扩增培养；另外细胞间连接紧密（CDH+），以维持类器官的紧密组织结构。同时表皮类器官不具备间充质成分（VIM-），类器官由表皮上皮细胞组成。此外，相比于阴性对照肝脏组织，小鼠表皮类器官中基底细胞及角质细胞标志物均具有较高的表达水平，进一步证实培养的类器官主要为表皮细胞组分。