类器官模型构建过程示意

P0D0：从 IBD 患者肠道组织中分离活性细胞，并置于三维培养体系中。

P0D1：细胞球内细胞持续增殖、分化，初步形成类器官结构。

P0D2：类器官内部细胞有序排列，出现明显腔室，模拟肠道管腔结构。

P0D4‒P0D7：部分区域类器官向外伸展，形成出芽现象，高度复现肠道组织在体内的发育与更新过程。

此模型为 IBD 发病机制研究及药物筛选提供理想体外实验平台。

类器官培养基验证数据

类器官模型构建

MasterAim® 炎症性肠病类器官培养体系已基于多例原代标本完成充分验证。如上图实验证明：6例患者的内镜活检样本均实现高效的类器官构建，并在本体系中稳定传代扩增。不同患者来源的类器官在形态上呈现一定的异质性，空泡状与出芽状结构的比例略有不同，但均可在本体系中获得高效扩增。

类器官传代与扩增

在本体系中，炎症性肠病（IBD）类器官P0至P5代中表现出快速生长，细胞数量呈指数级增长，且可实现长期稳定的传代扩增。

IBD类器官的传代窗口一般为7‒14天；自P2代起，传代时间趋于稳定，通常每10天左右进行一次传代，通常传代比例为1:3至1:10。

类器官鉴定

H&E染色结果显示：炎症性肠病类器官展现出炎症性肠病（IBD）的典型病理特征，具体表现为上皮细胞排列紊乱失序，伴有显著的组织增生现象及胞内囊泡结构异常增多。

免疫组化（IHC）检测结果显示，肠特异性转录因子CDX2在细胞核中呈弱阳性表达，提示肠上皮细胞虽仍维持一定分化状态，但其分化成熟度可能因炎症刺激而受损；细胞角蛋白CK20于胞质中阳性表达，表明肠上皮细胞特性得以保留，但其表达分布及强度改变或可反映炎症损伤后肠道黏膜的再生修复反应。此外，促炎细胞因子IL-6与TNF-α在类器官中均呈阳性表达，提示局部免疫细胞活化及炎症信号通路持续激活，为结直肠炎慢性化进展提供了关键的分子病理学证据。

分子鉴定（蛋白检测）

免疫荧光（IF）检测炎症性肠病（IBD）类器官模型的特征蛋白表达：Ki67呈现阳性表达，这一结果明确提示类器官内细胞增殖处于活跃状态，Villin是肠道上皮细胞的特异性标志物，且在类器官腔室内部呈现更强表达，为典型的肠道上皮特征。

免疫荧光（IF）检测炎症性肠病（IBD）类器官模型的特征蛋白表达：CDX2蛋白为转录因子家族的关键成员，在肠道发育及分化过程中发挥着核心调控作用，其阳性表达提示该IBD类器官模型具备肠道特异性分化特征，同时，CD45是是免疫细胞的重要标志性蛋白，CD45蛋白也呈现阳性表达表明存在免疫细胞相关成分。